African swine fever detection instrument operation method

　　非洲猪瘟检测仪器操作方法

　　非洲猪瘟检测仪器用于运行病毒检测实验，并对实验数据进行分析;仪器既可在实验室内操作，又可用于野外科学实验，配合相应试剂，对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、准确的定性检测。

　　非洲猪瘟检测仪器提前准备工作

　　1.请提前20分钟从冰箱中取出**盒，平衡至室温。

　　2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象;放置室温，轻摇均匀，待结晶*溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃

　　3.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

　　非洲猪瘟检测仪器实验所需自备试验器材：

　　1.检测仪(450nm)

　　2.高精度加样器及**头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒温箱或水浴锅

　　4.蒸馏水或去离子水

　　非洲猪瘟快速检测仪样本处理及要求：

　　1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或**钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4.非洲猪瘟检测仪器培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测**内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释**悬液，**浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使**破坏并放出**内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　非洲猪瘟检测仪器操作方法

　　1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL;

　　3.待测样本孔加待测样本10μL，样本稀释液40μL;

　　4.非洲猪瘟检测仪器随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴锅孵育15min。

　　7.每孔加入终止液50μL，15min内，在非洲猪瘟快速检测仪450nm波长处测定各孔的OD值。